Cy3-UTP荧光探针的应用与探究

2021-12-10

       什么是荧光探针?
荧光探针就是以荧光物质作为指示剂,并在一定波长光的激发下使指示剂产生荧光,通过检测所产生的荧光实现对被检测物质的定性或者定量分析。
荧光探针受到周围环境的影响,使其发生荧光发射发生变化,从而使人们获知周围环境的特征或者环境中存在的某种特定信息。
荧光基团和识别基团二者连接在同一个共轭体系中,荧光基团是该体系中最基本的组成部分,一般为芳香族的稠环化合物,其目的是将分子识别转换成不同形式的荧光信号,如荧光强度的增强或减弱、荧光寿命的变化、光谱的移动等。识别基团是为了实现这一选择性识别而合成的探针结构单元,是决定荧光分子探针和被检测体结合的灵敏度与选择性的部分,通常也称为受体。


       Cy3染料是一种明亮的橙色荧光染料,可使用532 nm激光线激发,并使用TRITC(四甲基罗丹明)滤光片组进行可视化。除了免疫细胞化学应用,Cy3染料通常用于标记核酸。Cy3属于氨基反应染料。CY3荧光染料用532nm波段激发(绿光),发出来的是橙色光。

       Cy3荧光团也是亲脂性神经元和长期DiI细胞追踪试剂的基础,该试剂添加烷基尾(≥12个碳)添加到核心荧光团上。Cy3染料是用于成像、流式细胞术和基因组应用的蛋白质和核酸结合物的传统橙色荧光标签。它也是经典亲脂性示踪剂DiI及其变体的基础。

其他说明:

       Click Chemistry用氰基3染料叠氮化物,一种Cy3®叠氮化物的类似物。Cy3是最广泛使用的荧光团之一,可通过各种荧光计、成像仪和显微镜进行检测。由于固有的高消光系数,氰基3也很容易用肉眼在凝胶和溶液中检测到。这是一种非磺化染料,需要有机共溶剂(DMF、DMSO或其他)在水中进行有效标记。该试剂的水溶性版本也是可用的。

       Sulfo-Cy3叠氮化物是一种磺化、亲水和高水溶性的化学染料。对于水相中各种分子的荧光团的亮度和光稳定性的标记,叠氮化亚砜-Cy3是一种理想的选择。点击反应可在纯水中进行,无需使用有机共溶剂。对于标记蛋白质甚至完整的生物对象,不需要有机共溶剂。在生命科学中,磺酸盐基团使Cy染料可溶于水,也减少了染料-染料相互作用引起的荧光猝灭。

       脉铂医药提供的Cy3-UTP,可以用作T7 RNA聚合酶的底物,取代UTP作为T7 RNA聚合酶的底物,通过体外转录产生标记的探针。在Cy3-UTP的参与下,生成的组装mRNA将发出橙色的荧光。此外,Cy3标记的mRNA在紫外光下很容易看到,无需在凝胶电泳后进一步染色。

       Cy3-UTP (Cyanine 3-UTP) can replace UTP as a substrate for T7 RNA polymerase and generate labeled probes through in vitro transcription.

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