【脉铂医药】MedBio|Firefly Luciferase mRNA (ARCA, 5mCTP, ψUTP)|MED18746|技术资料

1、mRNA基本资料：

       Messenger RNA (mRNA）——信使核糖核酸携带遗传信息，在蛋白质合成时充当模板的RNA。信使RNA 从脱氧核糖核酸（DNA）转录合成的带有遗传信息的一类单链核糖核酸（RNA）。它在核糖体上作为蛋白质合成的模板，决定肽链的氨基酸排列顺序。mRNA存在于原核生物和真核生物的细胞质及真核细胞的某些细胞器（如线粒体和叶绿体）中。RNA病毒和RNA噬菌体中的 RNA既是遗传信息的载体又具有mRNA的功能。生物体mRNA种类的多少与生物进化水平有关，高等生物所含的遗传信息多，mRNA的种类也多。生物体内某种mRNA的含量根据需要而有不同，如5龄蚕后部丝腺体的主要任务是快速合成大量丝心蛋白，因而编码丝心蛋白的mRNA含量特别多。有些细菌需要不断适应外部环境，其体内编码某些诱导酶的mRNA的含量也较多。将Firefly Luciferase mRNA (ARCA, 5mCTP, ψUTP)转染到细胞后，细胞可表达萤火虫萤光素酶（luciferase）蛋白，该蛋白最初是从萤火虫Photinus pyralis中分离出来的。萤火虫萤光素酶是一种常用的生物发光(bioluminescence)报告分子，常用于基因调控、细胞活力测定、ATP水平分析和体内成像等研究。萤光素酶的发光不同于荧光，不需要激发光，但需要底物。萤光素酶在ATP和氧存在的条件下，催化底物发生氧化反应，在560 nm处产生化学发光。该产品已经是5’端加帽，3’端加poly(A)尾和经过5mCTP/ψUTP 修饰的mRNA，可以模拟真核生物中加工成熟的mRNA。使用ARCA以共转录的方式对mRNA进行加帽，形成了Cap 0结构，增加了mRNA的稳定性和翻译效率。修饰核苷酸5mCTP和ψUTP的添加可以减少先天免疫刺激，增加mRNA的稳定性。Poly(A)尾的添加使mRNA更加稳定并提高mRNA的翻译起始效率。

2、mRNA优势：

（1）插入性突变的风险最小

可以转染非分裂细胞等较难转染的细胞

（2）短期表达且可控

可以精准瞬时地对表达进行调控，并且可以通过生理代谢途径完全讲解。

（3）高效的递送

mRNA针对的是细胞质，只需要穿过质膜即可。相比之下，质粒DNA和大多数类型的病毒载体必须到达细胞核，并穿过格外的膜屏障。

（4）快速的表达水平

转染后6-8小时即可检测到对应的表达，比DNA或者病毒基质的方法更快

3、mRNA转染的优点：

（1） 无需核吸收——蛋白直接在细胞质中表达

（2）其蛋白质表达比DNA转染更快

（3） 以完全不依赖启动子的方式表达蛋白质

（4） 没有基因组整合的风险

（5）非常适合转染生长缓慢或不分裂的细胞

（6）蛋白表达与mRNA的量直接相关

（7）瞬时转染：蛋白质的表达在有限的时间内持续，避免了与积累有关的毒性

4、Firefly Luciferase mRNA (ARCA, 5mCTP, ψUTP)基本资料及用途： 

将Firefly Luciferase mRNA (ARCA, 5mCTP, ψUTP)转染到细胞后，细胞可表达萤火虫萤光素酶（luciferase）蛋白，该蛋白最初是从萤火虫Photinus pyralis中分离出来的。萤火虫萤光素酶是一种常用的生物发光(bioluminescence)报告分子，常用于基因调控、细胞活力测定、ATP水平分析和体内成像等研究。萤光素酶的发光不同于荧光，不需要激发光，但需要底物。萤光素酶在ATP和氧存在的条件下，催化底物发生氧化反应，在560 nm处产生化学发光。
该产品已经是5’端加帽，3’端加poly(A)尾和经过5mCTP/ψUTP 修饰的mRNA，可以模拟真核生物中加工成熟的mRNA。使用ARCA以共转录的方式对mRNA进行加帽，形成了Cap 0结构，增加了mRNA的稳定性和翻译效率。修饰核苷酸5mCTP和ψUTP的添加可以减少先天免疫刺激，增加mRNA的稳定性。Poly(A)尾的添加使mRNA更加稳定并提高mRNA的翻译起始效率。